Хламидийный конъюнктивит метод полимеразной цепной реакции пцр
От точности и скорости диагностики напрямую зависит, как быстро можно будет начать лечение хламидиоза. Это заболевание не дает специфичных симптомов, поэтому лабораторные методы диагностики выходят на первый план для определения возбудителя.
Метод полимеразной цепной реакции — один из самых современных методов диагностирования. Врачи оценили его точность и скорость получения результатов, поэтому часто назначают этот тип анализа в ходе детального обследования и выявления хламидиоза.
Что представляет собой анализ
Данный тип исследования используют для всех возрастных категорий, его можно назначать даже новорожденным детям, не говоря о взрослых мужчинах и женщинах.
Объектом исследования при анализе является хламидия трахоматис — патогенный микроорганизм, присутствие которого в организме вызывает развитие хламидиоза.
По международной системе классификации заболеваний МКБ-10, которую используют медики всего мира, хламидийной инфекции присвоен код А74.
Болезнь может давать различные симптомы, а может протекать абсолютно бессимптомно, но ПЦР-исследование способно выявить бактерию даже в этом случае, чем не могут похвастаться остальные инструментально-клинические методы.
Суть анализа заключается в том, чтобы точно скопировать и быстро размножить фрагменты цепочки ДНК того микроорганизма, который стал причиной заболевания. Чтобы ускорить этот процесс, в лаборатории применяют специальные ферменты, способные активизировать постройку новых генетических цепочек.
Результатом таких воспроизведений становится увеличение генетического материала в пробе, доходящее до миллиона раз, что значительно облегчает его выявление. После того, как ДНК микроорганизма обнаружено, его тщательно исследуют под микроскопом и безошибочно определяют. Определение выполняет лаборант, сравнивая полученный образец с эталонными, имеющимися в лаборатории, которые заказывают в исследовательских институтах.
Нередко ПЦР используется при поиске причин бесплодия или неспособности к вынашиванию плода или осложнениях в ходе беременности. Также человек может пожелать провести диагностику после незащищенного полового акта с партнером, в здоровье которого не уверен.
Плюсы и минусы метода ПЦР
Среди неоспоримых преимуществ анализа выделяются такие:
- высокая чувствительность методики (не менее 95%);
- возможность применения в инкубационном, латентном или хроническом периоде хламидиоза, а также при носительстве;
- перечень материала для исследования строго не определяется, поэтому при невозможности использовать, к примеру, кровь можно легко заменить ее мокротой или слизью с половых органов;
- скорость получения данных после анализа (в среднем протокол выдают на руки на следующий день, но при острой необходимости возможно получить его и в день взятия пробы);
- анализ является прямым и позволяет выявить саму бактерию хламидии трахоматис, а не косвенные показатели ее присутствия — антитела.
Немаловажным фактором является то что полимеразная цепная реакция во время обследования позволяет одновременно выявлять некоторые сопутствующие заболевания, имеющие общую симптоматику с хламидиозом. Такими инфекциями являются практически все урогенитальные инфекции, многие вирусные и бактериальные болезни (уреаплазмоз, кандидоз, микоплазмоз, цитомегалия и пр.).
К недостаткам относятся:
- высокие требования по санитарным нормам к лаборатории паолимеразной цепной реакции, которые необходимо соблюдать, чтобы не получить ложноположительных результатов из-за загрязнения пробы;
- незначительная вероятность ложноотрицательного результата (для того, чтобы избежать этого явления необходимо тестирование сразу нескольких видов биоматериала);
- сложность интерпретации результатов, которые должен оценивать квалифицированный специалист, учитывая динамику хламидиоза и обладая достаточными знаниями в сфере иммунологии и инфекционных болезней;
- высокая стоимость исследования, что объясняется особыми требованиями к оснащению лаборатории и квалификацией персонала.
Несмотря на наличие недостатков, в настоящее время ПЦР признан самым удачным в плане диагностики хламидиоза.
Какой материал необходимо сдать для анализа
Для того, чтобы успешно провести тестирование образца при помощи полимеразной цепной реакции на хламидии, достаточно небольшого объема материала, что является еще одним преимуществом. Для диагностики подходит большинство биологических жидкостей, кровь и образцы мягких тканей.
У мужчин для определения хламидий берут:
- мазок из уретры;
- мазок из конъюнктивы;
- сперму;
- мочу;
- жидкость из предстательной железы;
- синовиальную жидкость.
Материалом, который берут для исследования у женщин, является:
- соскоб из уретры;
- эпителий из цервикального канала;
- моча;
- мазок из конъюнктивы;
- синовиальная жидкость.
Кровь берется из локтевой вены на руке, достаточно 10-15 мл. В современных лабораториях для этого используют специальные вакуумные системы, которые предотвращают попадание посторонних микробов в образец, увеличивая тем самым точность результатов.
Если необходим образец синовиальной жидкости, то делают пункцию суставного аппарата специальной толстой иглой с диаметром 0,8 мм. Введение этой иглы проходит болезненно, поэтому иногда перед введением применяют местное обезболивание.
Биоматериал могут отобрать в лаборатории, а могут делать отбор проб непосредственно в поликлинике или больнице, после чего направлять его на тестирование в ПЦР лабораторию. Некоторые частные диагностические центры за дополнительную плату берут образцы для исследования на дому у пациента.
Для оценки заражения околоплодных вод хламидиями во время беременности отбирают небольшое количество амниотической жидкости. Делают это только при острой необходимости, так как методика несет небольшую опасность для протекания беременности. Для этого производят прокол брюшной полости и под контролем УЗИ отбирают необходимое количество околоплодных вод.
Для всех беременных при постановке на учет в женскую консультацию назначают обследование на наличие хламидий в крови, для чего проводят ПЦР-тестирование, поскольку хламидиоз является тяжелой TORCH-инфекцией, способной нарушить ход беременности и осложнить развитие плода. Для такого типа обследования всегда используют кровь из вены.
Подготовка к анализу ПЦР
Правильная подготовка к обследованию на хламидии — одно из основных требований для получения корректных и точных результатов.
Для каждого типа биоматериала предусматривается специфичная подготовка. О всех требованиях, необходимых в процессе подготовки к ПЦР тестированию, пациенту должен подробно рассказать специалист, который выдает направление.
Перед сдачей мазков или мочи женщинам запрещено:
- на протяжении 3 суток пользоваться внутривагинальными свечами;
- применять вагинальные спринцевания, орошения или тампоны, пропитанные любыми настоями или отварами трав.
Сдавать мазок для ПЦР анализа на хламидиоз во время месячных нельзя.
Перед сдачей мазков или мочи как мужчинам, так и женщинам запрещается:
- ходить в туалет меньше, чем за 3 часа до отбора;
- выполнять гигиенические процедуры с применением дезинфицирующих или антибактериальных средств;
- заниматься сексом на протяжении 3-х предшествующих суток.
Для девочек возрастом до 14 лет мазок могут брать не из влагалища, а из слизистой оболочки преддверия влагалища, чтобы не повредить девственную плеву.
Перед сдачей крови для ПЦР на хламидии нужно не употреблять спиртные напитки, несколько дней не есть жирную пищу и жареные блюда, а также не курить за несколько часов до манипуляции.
Сдавая мочу, необходимо помнить, что показательнее всего — первая утренняя порция, первые и последние капли отбрасываются. Контейнер обязательно должен быть стерильным. Для исследования нужно предоставить около 50 миллилитров мочи.
Перед отбором материала любого типа для определения хламидий нельзя принимать антибиотики или уросептики. Это возможно только в том случае, если исследование проводится для определения эффективности лечения, в остальных случаях применять такие препараты на протяжении двух недель перед ПЦР-диагностикой запрещено.
Расшифровка результатов
Исследование на наличие хламидий при помощи полимеразной цепной реакции является качественным методом, то есть он показывает не количество бактерий в пробе, а их присутствие или отсутствие.
В протоколе ПЦР анализа указывается фамилия пациента, дата исследования, название бактерии (Chlamydia trachomatis) и полученный результат: положительный («обнаружено») или отрицательный («не обнаружено»). Иногда их описывают при помощи значков «+» или «-».
Если получен положительный результат, то это означает, что в организме присутствует острый процесс, или пациент является носителем заболевания.
В норме отрицательный результат означает, что в пробе не обнаружены такие бактерии, то есть, он здоров.
Если у взрослого человека обнаружена бактерия хламидия трахоматис, это означает, что половому партнеру обязательно нужно обследоваться даже в том случае, если клинических проявлений хламидиоза у него нет. Отсутствие симптомов не гарантирует отсутствие болезни, у него может быть бессимптомная форма, которая не исключает осложнений и возможности заразить других людей.
В завершение следует отметить, что ПЦР является одним из основных средств выявления хламидиоза в настоящее время, тогда как другие методы преимущественно используют в качестве дополнительных методов.
Об особенностях диагностики хламидиоза методом ПЦР на данном видео рассказывает врач-венеролог.
Источник
ПЦР анализы на хламидии
Возбудителем урогенитальной хламидийной инфекции (хламидиоза) является грамотрицательная бактерия Chlamydia trachomatis, облигатный внутриклеточный паразит размером 250-300 нм.
В диагностике хламидиоза из всех существующих методов самым достоверным признан метод ПЦР.* Метод полимеразной цепной реакции для диагностики хламидиоза имеет чувствительность 98-100%.
Преимущества ПЦР диагностики при хламидиозе
1. Прямое определение хламидий в биоматериале.
Ряд методов, применяемых в диагностике хламидиоза, например, метод ИФА, выявляет только антитела и/или антигены возбудителя, что не является прямым подтверждением хламидийной инфекции, а свидетельствует лишь о возможном ее наличии.
Метод полимеразной цепной реакции (метод ПЦР) – молекулярно-биологический метод, который направлен на выявление специфических для хламидий фрагментов ДНК и напрямую указывает на наличие инфекции.
2. Высокая специфичность.
Специфичность метода ПЦР в диагностике хламидиоза достигает 100%. Данный факт обусловлен тем, что в биоматериале, подвергаемом анализу, выявляется фрагмент ДНК, генетический материал хламидий. ДНК является неотъемлемой частью любого микроорганизма и не может существовать вне возбудителя, кроме случаев применения антибактериальных препаратов, когда ДНК возбудителя может определяться в течении месяца.
Этого нельзя сказать об иммунологических методах анализа, при которых часто встречаются ложноположительные реакции из-за перекрестно-реагирующих антител и антигенов.
3. Высокая чувствительность.
Для выполнения ПЦР анализа достаточно присутствия в биоматериале единичных клеток хламидий. Аналитическая чувствительность ПЦР анализа 10-100 клеток в биоматериале, когда у других тестов 103-105 клеток (микросокпический, бактериологический методы).
Существующие рутинные методы диагностики хламидийной инфекции – микроскопические, иммунологические, бактериологические – не позволяют установить возбудителя у 20-40% инфицированных лиц, в то время как метод ПЦР позволяет выявить хламидии практически у 100% больных.
4. Универсальность метода ПЦР.
Наряду с выявлением ДНК хламидий в исследуемом биоматериале метод ПЦР позволяет одновременно обнаружить несколько возбудителей, например, трихомонад, гонококков и др.
5. Скорость получения результата.
Проведение ПЦР анализа полностью автоматизировано, что позволяет получить результаты в самые оптимальные сроки, и, как следствие, дает возможность получить быстрое и эффективное лечение.
6. Диагностика латентных и вялотекщих форм хламидиоза.
Урогенитальная хламидийная инфекция отличается бессимптомным течением, например, более чем у 70% женщин хламидиоз протекает бессимптомно. Поэтому ранее рутинные методы диагностики не позволяли выявить эту инфекцию. В последние годы в связи с широким применением метода ПЦР в клинической практике фиксируется больше случаев заболевания.
Хламидиоз: особенности
Неосложненная форма хламидиозной инфекции протекает у мужчин чаще в форме воспаления уретры (уретрит), у женщин – в форме слизисто-гнойного воспаления слизистой оболочки шейки матки (цервицит), уретры (уретрит).
Преимущественно урогенитальная хламидиозная инфекция протекает в малосимптомной форме и начинает проявляться на стадии осложнений.
Для полноценной диагностики урогенитального хламидиоза методом ПЦР берут соскоб из уретры, мочу, секрет предстательной железы у мужчин, и соскоб из цервикального канала, влагалища у женщин.
К распространенным осложнениям урогенитального хламидиоза относят:
- орхоэпидидимит, эпидидимит, простатит, стриктуру уретры;
- цистит,
- ВЗОМТ (воспалительные заболевания органов малого таза);
- эрозивные изменения шейки матки;
- бесплодие.
К возможным осложнениям хламидиоза при распространении за пределы урогенитального тракта относят:
- хламидийный конъюктивит;
- хламидийный фарингит;
- хламидийный гепатит,
- болезнь Рейтера (сочетающий в себе поражение мочеполовых органов, суставов и коньюнктивы);
спаечную болезнь специфической этиологии.
Проведение ПЦР-диагностики хламидийной инфекции актуально для пациентов:
- в целях профилактического обследования;
- с характерными жалобами или подтвержденным диагнозом заболевания, передаваемого половым путем;
- при планировании беременности;
- обследование беременных;
- при отягощенном акушерско-гинекологическом анамнезе;
- с подозреним на урогенитальный хламидиоз;
- перед оперативными вмешательствами на половых органах и органах малого таза;
- с подозрением на коньюктивит, артрит хламидийной этиологии.
В лабораториях CMD для проведения ПЦР исследования имеется лучшее оборудование и высококвалифицированный персонал. На всех этапах ПЦР исследования – от взятия биоматериала до выдачи готового результата — соблюдаются все требования менеджмента качества, чем полностью исключается попадание чужеродного генетического материала и получение ложноположительного результата.
Для диагностических мероприятий мы используем наборы реактивов ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, которые используются не только у нас в стране, но и зарубежом, имеют сертификат соответствия ЕС.
Исследование хламидийной инфекции в CMD.
- Хламидия, качественное определение ДНК, ПЦР
- Хламидия, количественное определение ДНК, ПЦР
- Хламидия, качественное определение рибосомальной РНК методом NASBA
- Хламидия, полуколичественное определение антител класса IgG, ИФА
- Хламидия, полуколичественное определение антител класса IgА, ИФА
- Хламидия, качественное определение антител класса IgМ, ИФА
Для оптимального выбора исследований обращайтесь к своему лечащему врачу.
*Федеральные клинические рекомендации. Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. 2016 г.
Источник
[09-002]
Chlamydia trachomatis, ДНК [реал-тайм ПЦР]
320 руб.
Исследование для выявления возбудителя урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) хламидий в образце биоматериала.
Синонимы русские
Хламидия, возбудитель хламидиоза.
Синонимы английские
Ch. trachomatis, DNA (qPCR, Real-time PCR, RT-PCR), Chlamydia trachomatis by Amplified Detection.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Отделяемое конъюнктивы, секрет простаты, первую порцию утренней мочи, соскоб из прямой кишки, синовиальную жидкость, соскоб урогенитальный, эякулят, мазок из зева (ротоглотки).
Общая информация об исследовании
Chlamydia trachomatis (хламидия трахоматис) – бактерия, внутриклеточный паразит, возбудитель нескольких заболеваний человека. В частности, некоторые серовары этого вида вызывают трахому и венерическую лимфогранулему. В России наиболее распространена хламидийная инфекция мочеполовой системы (урогенитальный хламидиоз). Она передается половым путем, а также от матери к ребенку при родах. Возможен и контактно-бытовой путь передачи. Chlamydia trachomatis – самый частый возбудитель негонококкового уретрита. У женщин хламидиоз встречается чаще, чем у мужчин.
Инкубационный период составляет от 2 недель до 1 месяца. Часто (примерно в половине случаев) хламидиоз протекает бессимптомно.
Начальные симптомы инфекции: жжение и боль при мочеиспускании, слизистые выделения, помутнение мочи, слабость, немного повышенная температура, у мужчин – воспаление мочеиспускательного канала, которое длится долгое время, у женщин – слизистые или гнойные выделения из влагалища. В дальнейшем могут возникать различные осложнения: эпидидимит, эндометрит, конъюнктивит, артрит и др.
Считается, что хламидийная инфекция опасна при беременности, так как может привести к преждевременным родам, выкидышу, сниженному весу новорождённых и даже гибели плода.
Кроме того, новорождённый ребенок иногда заражается хламидиозом от матери при прохождении через родовой канал, из-за чего у него развивается конъюнктивит либо пневмония.
Для анализа на хламидии и диагностики хламидиоза применяют серологические методы (например, ИФА), посев хламидий, а также выявление ДНК бактерий (например, ПЦР).
У серологических методов и посева есть ряд ограничений, так что тесты на основе ПЦР считаются самыми удобными и чувствительными.
ПЦР в реальном времени (РТ-ПЦР) – это лабораторный метод, который позволяет найти в пробе ДНК возбудителя: если в образце присутствует Chlamydia trachomatis, то реал-тайм ПЦР обнаружит ДНК этой бактерии. Принцип заключается в том, что ДНК возбудителя, которого хотят выявить, много раз копируется с помощью специальных ферментов (ДНК-полимераз). Обычно проходит несколько десятков циклов и в ходе каждого нужная ДНК удваивается. В результате количество исследуемой ДНК увеличивается в миллионы раз и ее можно детектировать с помощью флуоресцентного красителя.
При ПЦР в реальном времени количество ДНК выявляется в процессе копирования, после каждого цикла. Но при этом с помощью РТ-ПЦР нельзя различить формы инфекции (например, свежеприобретенное или давнее заражение).
Для чего используется ПЦР-анализ на хламидии?
- Для диагностики инфекции, вызванной Chlamydia trachomatis (хламидия трахоматис), и мониторинга ее лечения.
Когда назначается исследование?
- Для диагностики урогенитального хламидиоза при следующих симптамах:
- жжение и боль при мочеиспускании,
- покраснение в области наружного отверстия уретры у мужчин,
- слизистые выделения из половых путей,
- помутнение мочи,
- слабость,
- субфебрильная температура.
- Для исключения хламидиоза при планировании беременности (и во время нее).
- После случайных половых контактов.
- Если половой партнер заражен хламидиями.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Отрицательный результат
- Хламидийная инфекция отсутствует. Воспаление вызвано другим возбудителем.
Положительный результат
- Хламидийная инфекция присутствует. Если есть воспаление, то оно, вероятно, вызвано хламидиями. В этом случае содержание ДНК в пробе высокое.
- Хламидии присутствуют, однако воспаление может быть вызвано другим возбудителем. В этом случае ДНК хламидий выявлена в небольшом количестве.
Также рекомендуется
- Chlamydia trachomatis, IgM
- Chlamydia trachomatis, IgG
- Chlamydia trachomatis, IgA
- Посев на Chlamydia trachomatis
- Посев на Chlamydia trachomatis с определением чувствительности к антибиотикам
Кто назначает исследование?
Врач общей практики, терапевт, инфекционист, гинеколог.
Литература
- Goldman’s Cecil Medicine. 24th ed. Goldman L, Schafer A.I., eds. Saunders Elsevier; 2011.
- Howie S. E. Chlamydia trachomatis infection during pregnancy: known unknowns. Discov Med. 2011; 12(62): 57 – 64.
Источник
