Что такое окрашивание роговицы

Современные возможности применения красителей для диагностики повреждений эпителия роговицы и конъюнктивы глаз.
Авторы статьи: Мягков А.В., Соголовская Е.Г.

Важное значение для исследования целостности эпителия роговицы и конъюнктивы имеет применение красителей. Метод прокрашивания представляет собой один из наиболее простых, эффективных, бесконтактных и очень информативных методов исследования эпителия на клеточном уровне. Несмотря на то, что сегодня красители в основном применяются для диагностики повреждения роговицы и синдрома сухого глаза, подбора жестких и мягких контактных линз, а также их используют и для определения множества других состояний поверхности глаза на клетках роговицы и конъюнктивы.

В России офтальмологи для исследования роговичных повреждений традиционно используют в основном 2% водный раствор низкомолекулярного флюоресцеина. Впервые флюоресцеин для прокрашивания роговицы стали использовать в конце XIX века [1]. Растворенные в воде молекулы флюоресцеина проникают во внутриклеточное пространство между живыми клетками. Повреждение клеточной мембраны в результате дегенерации или гибели клеток делает внутриклеточное пространство более доступным для проникновения флюоресцеина. Эта особенность флюоресцеина делает его более удобным для исследования проницаемости в эпителиальных и эндотелиальных клетках роговицы [10].

Флюоресцеин используется также и для прокрашивания повреждений конъюнктивы глазного яблока, но в этом случае могут возникнуть диагностические трудности из-за наличия красителя, как в клетках, так и во внутриклеточном пространстве. Feenstra R. и Tseng S. в своих исследованиях показали, что водный раствор низкомолекулярного флюоресцеина имеет способность окрашивать некоторые виды здоровых клеток in vitro [5].

Способность флюоресцеина окрашивать роговицу и конъюнктиву позволило офтальмологам использовать его с диагностической целью при выявлении признаков сухости глаза[2]. Но в тоже время, надо учитывать, что наличие флюоресцеина в слезной пленке может препятствовать исследованию состояния окрашенного эпителия и конъюнктивы глазного яблока, маскирую их дефектные участки.

В мировой офтальмологии жидкий флюоресцеин в основном используют в качестве контрастного вещества для исследования сосудистой системы сетчатой оболочки глаза – флюоресцентной ангиографии. Для диагностики повреждений переднего отрезка глаза в основном используют сухие стерильные диагностические полоски BioGlo. Полоски BioGlo очень просты и удобны в применении. Флюоресцеиновую полоску увлажняют с помощью стерильного физиологического раствора и осторожно стряхивают несвязанные излишки. Исследуемого просят смотреть некоторое время вниз, приподнимая верхнее веко, и влажную полоску осторожно помещают на конъюнктиву выше верхнего лимба. После 1 или 2 морганий флюоресцеин распространяется по поверхности роговицы, окрашивая поврежденные участки эпителия в ярко-зеленый цвет.

В контактной коррекции зрения низкомолекулярный флюоресцеин используется для оценки посадки жестких газопроницаемых и газонепроницаемых контактных линз, в том числе ортокератологических. Для подбора мягких контактных линз используется высокомолекулярный флюоресцеин – SoftGlo, более крупные и тяжелые молекулы которого не внедряются в структуру полимера мягкой контактной линзы и не окрашивают её. Осмотр производится с помощью щелевой лампы с использованием синего фильтра. При нормальном положении линзы на глазу флюоресцеин равномерно распределяется по всему подлинзовому пространству. Заполнение красителем подлинзового пространства преимущественно по периферии свидетельствует о «плоской» посадке линзы, в центре – о «крутой»[4].

Кроме флюоресцеина, в качестве красителей для диагностики повреждения роговицы и конъюнктивы, в том числе и при синдроме сухого глаза, используется ещё два красителя: бенгальский разовый и лиссаминовый зеленый, которые, к сожалению практически не используются в практике отечественных офтальмологов [2].

Бенгальский розовый является производным флюоресцеина. Оба красителя относятся к группе гидроксиксантинов, но отличаются по молекулярной структуре. По данным литературы впервые закапывание бенгальского розового в качестве красителя упоминалось 1914 г., но наиболее широкое применение этого красителя в практике офтальмолога стало возможным благодаря шведскому врачу Генриху Сьёгрену, который при диагностике сухого керато-конъюнктивита заметил выделяющийся окрашенный участок слезной пленки после закапывания в поврежденные глаза пациента бенгальского розового [13]. С тех пор бенгальский розовый используется для диагностики множества другой глазной патологии, включая герпетические эпителиальные повреждения роговицы, поверхностный точечный кератит, дисфункцию мейбомиевых желез, синдром сухого глаза и т.п.

Бенгальский розовый, так же как и флюоресцеин, окрашивает не только мертвые или погибающие клетки, но и нормальные, здоровые, живые клетки и межклеточное пространство [5]. Исследование бенгальского розового показало, что он не окрашивает поверхность глаза при наличие физиологической слезной пленки или искусственной слезы. Компоненты слезной пленки, такие как муцин (олигосахарид), защищают поверхность здорового глаза, выполняя роль барьера для бенгальского розового, который окрасил бы эти клетки, если бы они не были эффективно защищены от молекул красителя. Таким образом, на участках с поврежденной целостностью слезной пленки или с дисфункцией выработки компонентов слезной пленки, бенгальский розовый может проникать через поверхность глаза , окрашивая главным образом ядра клеток и, в меньшей степени, другие структуры [5,7].

Бенгальский розовый также как и флюоресцеин обладает цитотоксичностью по отношению к эпителиальным клеткам [5,6]. К недостаткам бенгальского розового можно отнести также и субъективные ощущения пациента (жжение и чуство инородного тела при закапывании в конъюнктивальную полость). Цитотоксичность и неприятные субъективные ощущения являются основными причинами отказа офтальмологов от применения бенгальского розового в своей практике.

В отличие от известных флюоресцеина и бенгальского розового менее известный лиссаминовый зеленый не относится к группе ксантиновых красителей. Он является синтетическим производным, содержащим две аминофениловые группы. Лиссаминовый зеленый широко используется в качестве красителя в косметической, пищевой и фармацевтической промышленности [12]. В офтальмологической практике лиссаминовый зеленый применяется для прокрашивания эпителия роговицы в виде отдельно упакованных стерильных сухих полосок Lissamine Green.

Важной диагностической особенностью лиссаминового зеленого является то, что он окрашивает главным образом клетки с поврежденной мембраной и/или безжизненные клетки, как бенгальский розовый, заполняя их ядра. Другой особенностью окрашивания лиссаминовым зеленым является то, что его можно применять для диагностики эпителия при наличие покраснения глаза. Окрашивание лиссаминовым зеленым видно с большим контрастом на красном фоне, в то время как розовато-красный оттенок бенгальского розового или желтоватый оттенок флюоресцеина могут быть неразличимы на фоне красного глаза [10,12].