Раствор для окрашивания роговицы
Диагностическое окрашивание роговицы у животных
Флюоресциин – это оранжевый краситель, который становится зелёным в щелочной среде слёзной плёнки. Он обладает сильными липофобными и гидрофильными свойствами. Поэтому, он не контактирует с жиросодержащими клеточными мембранами роговичного эпителия, но приклеивается и поглощается стромой роговицы. Это имеет большое значение при диагностике язв роговицы, где эпителий отсутствует, и строма остаётся обнажённой.
Лучше использовать одноразовые расходные материалы, такие как стерильные одноразовые флюоресцииновые тест-полоски или одноразовые капли. От больших капельных флаконов с флуоресцином лучше вообще отказаться, т.к. они быстро обсеменяются бактериями Pseudomonas aeruginosa и потенциально опасны для роговицы.
Окрашивание роговицы проводят прикладыванием полоски к вентральной или дорсальной бульбарной конъюнктиве. Слеза окрашивается флуоресцином и при моргании окрашивает все гидрофильные структуры. У пациентов со сниженной слезопродукцией полоска предварительно должна смачиваться стерильным физиологическим раствором или водой.
После нескольких моргательных движений глаз следует еще раз промыть для удаления излишков флюоресцина с глазной поверхности. Для этих целей отлично подходят вода для инъекций или физиологический раствор NaCl 0,9%.
Интерпретация результатов, обычно, не вызывает сложности.
- Флуоресцин окрасил дефект – значит этот дефект лишен эпителия и причина роговичного синдрома и окулярного дискомфорта найдена. Здесь язва или эрозия роговицы.
- Флюоресцин проникает за границы области лишенной эпителия и заходит под блестящий эпителий, прилегающий к основному дефекту, значит весь этот эпителий (под которым произошло прокрашивание) – патологический эпителий. В этом случае его лучше удалить, т.к. он не имеет плотного прилегания к строме, и будет отторгаться.
- Флюоресцин не окрашивает язву, хотя впадина в роговице отчетливо видна. Такое состояние говорит о начале эпителизации язвы роговицы. В таких случаях нужно быть предельно внимательным для того, чтобы понять действительно произошло окрашивание тканей или краска просто скопилась в углублении. Для уточнения результата обильно промойте роговицу физ. Раствором.
- Флуоресцин частично окрашивает видимый дефект. Это говорит о начале эпителизации. Эпителий, мигрирующий с краев на дно язвы, будет хорошо выявляться на фоне окрашенной флюоресцином стромы (т.к. сам не окрашивается).
- Десцеметова мембрана не окрашивается флюоресцином, поэтому неокрашенная область в центре глубокой язвы является скорее предостерегающим, нежели ободряющим признаком.
Что делать если интерпритация результатов затруднена и Вы сомневаетесь в достоверности?
- Промойте глаз еще раз и не давайте моргать животному.
- Используйте голубой кобальтовый фильтр или лампу Вуда. При применении такого освещения в темноте краситель будет светится и станут различимы даже мельчайшие дефекты.
- Возьмите увеличительное стекло или используйте выключенную щелевую лампу Heine HSL-150. Все мельчайшие подозрительные точки станут различимы.
Итак, флюоресцин – это ценный инструмент в диагностике язвообразования и должен рутинно использоваться в ветеринарной офтальмологии. Обычно он дает точный результат и не имеет противопоказаний. Язва роговицы не может диагностироваться только по внешнему виду и наличию роговичного синдрома, и поэтому каждый красный и болезненный глаз должен быть окрашен флуоресцином. Даже при наличии перфорации роговицы, стерильный флюоресцин не навредит внутриглазным тканям. Кроме того, флюоресцин используют при проведении пробы Зейделя, при подозрении на перфорацию роговицы.
Окрашивание роговицы бенгальским розовым.
Розбенгал- это тёмный (тёмно-красного) цвета анилиновый краситель, окрашивающий мёртвые и повреждённые ткани. Он обладает небольшим раздражающим действием. Розбенгал широко применяется в гуманной медицине для выявления повреждений глаз при синдроме сухого глаза.
Обычно применяется в виде 0,5—1% раствора или специальных пропитанных полосок.
Оказывает большую помощь при диагностике некоторых форм герпетических кератитов у кошек, когда повреждённые ткани не окрашиваются флюорисцеином.
Окрашивание роговицы лиссаминовым зеленым.
Лиссамин – это пищевой краситель Е142, который широко применяют в лекарственной промышленности, косметологии и производстве продуктов питания. Добавляется в зеленый горошек.
Принцип действия такой же как у бенгальского зеленого, но он не токсичен для эпителия и не канцерогенен. Более того, он доступен в качестве пропитанных одноразовых бумажных полосок Greenglo фирмы Hub Pharmaceuticls, LLC.
Показаниями для применения лиссамина являются оценка поверхностных дефектов эпителия (герпесвирусная инфекция кошек), дефектов муциновой части прекорнеальной слезной пленки.
Использование тест полосок аналогично использованию полосок флуоресцина. Положительным считается любое окрашивание роговицы после нескольких моргательных движений. Обычно происходит древовидное (дендритное) окрашивание, которое характерно для FeHV-1-инфекции. Другие случаи положительного окрашивания бывают связаны с начальными стадиями синдрома сухого глаза (сухого кератоконъюнктивита), когда начинаются изменения (возникают дефекты) в муциновом слое прекорнеальной слезной пленки.
Проба Зейделя.
Проводится при любых клинически обоснованных предположениях на сквозное повреждение роговицы. Данное исследование призвано дифференцировать прободные раны роговицы от непрободных и позволяет диагностировать даже небольшие проникновения роговицы. Проводится путем нанесения капли концентрированного раствора флуоресцина в область раны и последующий осмотр в ультрафиолетовом свете. При положительной пробе Зейделя внутриглазная жидкость, выходя наружу из перфорированной роговицы, смешивается с флуоресцином и в ультрафиолетовом свете бывает видна как светящаяся полоска от дефекта к нижнему полюсу. При сомнении в интерпретации пробы Зейделя у собак и кошек рекомендуется легкое нажатие на глаз, при этом флуоресцирующая жидкость будет более заметна.
Ветеринарный врач — офтальмолог
Константиновский Александр Андреевич
Источник
Флюоресцентный краситель широко применяется в ветеринарной офтальмологии. Он позволяет диагностировать многие патологии, будь то болезни/повреждения роговицы, патологии носослёзной системы, ухудшение качества слезы.
Тест с флюоресцеином собаке и кошке.
Тест с флюоресцеином для собак и кошек предназначен для выявления повреждений на роговице. Таких как эрозия роговицы, язва роговицы, кератит, травмы роговицы. Флюоресцеин не имеет противопоказаний при использовании у любых видов животных. В ходе теста стерильная тест-полоска прикладывается к глазному яблоку. Этот особый краситель “оседает” только на поврежденных участках роговицы. Благодаря этому тесту участки роговицы,, лишенные эпителиального слоя окрасятся в зелёный цвет, что позволит специалисту определить степень и характер повреждения, а также его точное расположение. Иногда дефект на роговице виден сразу, а иногда – нет. Вот, как, например, в этом случае. Обратите внимание, собаке патологическая ресница трёт глаз. Там, где трение самое сильное, повреждён эпителиальный слой, и мы видим прокрашивание роговицы. Вот, что такое тест с флюоресцеином.
Проба Зейделя у собак и кошек.
Если у ветеринарного офтальмолога возникает сомнение относительно герметичности роговицы (например, при травме глаза), проводится модифицированный тест с флюоресцеином – Проба Зейделя. Эта проба предназначена для диагностики сквозных повреждений роговицы. Пациенту на роговицу наносят каплю раствора флюоресцеина и наблюдают глаз в кобальтовом свете. При наличии перфорации вытекающая внутриглазная жидкость окрасится в цвет красителя и будет видна в виде “разводов”. На фотографии ниже вы можете видеть язву роговицы и зелёные разводы на поверхности. Флюоресцеин окрашивает внутриглазную жидкость.
Положительная проба Зейделя у собаки
Тест Джонс-1 (тест на проходимость носослёзных каналов).
Этот тест применяется кошкам и собакам для проверки проходимости носослезных каналов. В норме слеза по носослёзному каналу попадает из конъюнктивального мешка в нос. Таким образом большое количество слезы естественным образом утилизируется, унося с собой микробов, мелкие частицы, остатки глазных капель и тд. При нормальной проходимости каналов флюоресцеин пройдет по всему тракту от слезной точки до носа, окрасив носовое зеркальце.
Когда нужно проводить тест Джонса-1 ?
- Слезотечение (“плачут” глаза, “текут” глаза)
- Наличие слезных дорожек
- Закупорка носослезных каналов
Если проходимость затруднена, то в зависимости от степени назначается терапевтическое лечение. При полной непроходимости рекомендуется дренирование носослезных каналов. Дренирование носослёзных каналов, или промывание носослёзных каналов – это простая и безболезненная процедура. С помощью специальной канюли мы пропускаем по носослёзному каналу небольшое количество жидкости. Которая вымывает содержимое канала и восстанавливает его пропускную способность.
Тест Rose Bengal (окрашивание роговицы бенгальским розовым)
Бенгальский розовый – это краситель насыщенного розового цвета. Он окрашивает мертвые и дегенерированные клетки и применяется для диагностики ряда болезней. Основные среди них – это герпесвирусный кератит кошек (FHV-1), пигментный кератит у мопсов, пекинесов, и других пород. В ходе этого теста мы точно также капаем каплю красителя и через несколько секунд оцениваем результат с помощью осветительного прибора.
Тест Lissamine Green (Тест с лиссаминовым зелёным)
Лиссаминовый зеленый – это краситель насыщенного зелёного цвета. Он применяется для выявления аномалий роговицы, бульбарной конъюнктивы и конъюнктивы у свободных краев век.
Используется в комплексной диагностике Синдрома сухого глаза, кератитов, кератоконъюнктивитов, эрозий роговицы.
Идеальное средство для прокрашивания эпителиальных повреждений на «красном» глазу.
Источник
Современные возможности применения красителей для диагностики повреждений эпителия роговицы и конъюнктивы глаз.
Авторы статьи: Мягков А.В., Соголовская Е.Г.
Важное значение для исследования целостности эпителия роговицы и конъюнктивы имеет применение красителей. Метод прокрашивания представляет собой один из наиболее простых, эффективных, бесконтактных и очень информативных методов исследования эпителия на клеточном уровне. Несмотря на то, что сегодня красители в основном применяются для диагностики повреждения роговицы и синдрома сухого глаза, подбора жестких и мягких контактных линз, а также их используют и для определения множества других состояний поверхности глаза на клетках роговицы и конъюнктивы.
В России офтальмологи для исследования роговичных повреждений традиционно используют в основном 2% водный раствор низкомолекулярного флюоресцеина. Впервые флюоресцеин для прокрашивания роговицы стали использовать в конце XIX века [1]. Растворенные в воде молекулы флюоресцеина проникают во внутриклеточное пространство между живыми клетками. Повреждение клеточной мембраны в результате дегенерации или гибели клеток делает внутриклеточное пространство более доступным для проникновения флюоресцеина. Эта особенность флюоресцеина делает его более удобным для исследования проницаемости в эпителиальных и эндотелиальных клетках роговицы [10].
Флюоресцеин используется также и для прокрашивания повреждений конъюнктивы глазного яблока, но в этом случае могут возникнуть диагностические трудности из-за наличия красителя, как в клетках, так и во внутриклеточном пространстве. Feenstra R. и Tseng S. в своих исследованиях показали, что водный раствор низкомолекулярного флюоресцеина имеет способность окрашивать некоторые виды здоровых клеток in vitro [5].
Способность флюоресцеина окрашивать роговицу и конъюнктиву позволило офтальмологам использовать его с диагностической целью при выявлении признаков сухости глаза[2]. Но в тоже время, надо учитывать, что наличие флюоресцеина в слезной пленке может препятствовать исследованию состояния окрашенного эпителия и конъюнктивы глазного яблока, маскирую их дефектные участки.
В мировой офтальмологии жидкий флюоресцеин в основном используют в качестве контрастного вещества для исследования сосудистой системы сетчатой оболочки глаза – флюоресцентной ангиографии. Для диагностики повреждений переднего отрезка глаза в основном используют сухие стерильные диагностические полоски BioGlo. Полоски BioGlo очень просты и удобны в применении. Флюоресцеиновую полоску увлажняют с помощью стерильного физиологического раствора и осторожно стряхивают несвязанные излишки. Исследуемого просят смотреть некоторое время вниз, приподнимая верхнее веко, и влажную полоску осторожно помещают на конъюнктиву выше верхнего лимба. После 1 или 2 морганий флюоресцеин распространяется по поверхности роговицы, окрашивая поврежденные участки эпителия в ярко-зеленый цвет.
В контактной коррекции зрения низкомолекулярный флюоресцеин используется для оценки посадки жестких газопроницаемых и газонепроницаемых контактных линз, в том числе ортокератологических. Для подбора мягких контактных линз используется высокомолекулярный флюоресцеин – SoftGlo, более крупные и тяжелые молекулы которого не внедряются в структуру полимера мягкой контактной линзы и не окрашивают её. Осмотр производится с помощью щелевой лампы с использованием синего фильтра. При нормальном положении линзы на глазу флюоресцеин равномерно распределяется по всему подлинзовому пространству. Заполнение красителем подлинзового пространства преимущественно по периферии свидетельствует о «плоской» посадке линзы, в центре – о «крутой»[4].
Кроме флюоресцеина, в качестве красителей для диагностики повреждения роговицы и конъюнктивы, в том числе и при синдроме сухого глаза, используется ещё два красителя: бенгальский разовый и лиссаминовый зеленый, которые, к сожалению практически не используются в практике отечественных офтальмологов [2].
Бенгальский розовый является производным флюоресцеина. Оба красителя относятся к группе гидроксиксантинов, но отличаются по молекулярной структуре. По данным литературы впервые закапывание бенгальского розового в качестве красителя упоминалось 1914 г., но наиболее широкое применение этого красителя в практике офтальмолога стало возможным благодаря шведскому врачу Генриху Сьёгрену, который при диагностике сухого керато-конъюнктивита заметил выделяющийся окрашенный участок слезной пленки после закапывания в поврежденные глаза пациента бенгальского розового [13]. С тех пор бенгальский розовый используется для диагностики множества другой глазной патологии, включая герпетические эпителиальные повреждения роговицы, поверхностный точечный кератит, дисфункцию мейбомиевых желез, синдром сухого глаза и т.п.
Бенгальский розовый, так же как и флюоресцеин, окрашивает не только мертвые или погибающие клетки, но и нормальные, здоровые, живые клетки и межклеточное пространство [5]. Исследование бенгальского розового показало, что он не окрашивает поверхность глаза при наличие физиологической слезной пленки или искусственной слезы. Компоненты слезной пленки, такие как муцин (олигосахарид), защищают поверхность здорового глаза, выполняя роль барьера для бенгальского розового, который окрасил бы эти клетки, если бы они не были эффективно защищены от молекул красителя. Таким образом, на участках с поврежденной целостностью слезной пленки или с дисфункцией выработки компонентов слезной пленки, бенгальский розовый может проникать через поверхность глаза , окрашивая главным образом ядра клеток и, в меньшей степени, другие структуры [5,7].
Бенгальский розовый также как и флюоресцеин обладает цитотоксичностью по отношению к эпителиальным клеткам [5,6]. К недостаткам бенгальского розового можно отнести также и субъективные ощущения пациента (жжение и чуство инородного тела при закапывании в конъюнктивальную полость). Цитотоксичность и неприятные субъективные ощущения являются основными причинами отказа офтальмологов от применения бенгальского розового в своей практике.
В отличие от известных флюоресцеина и бенгальского розового менее известный лиссаминовый зеленый не относится к группе ксантиновых красителей. Он является синтетическим производным, содержащим две аминофениловые группы. Лиссаминовый зеленый широко используется в качестве красителя в косметической, пищевой и фармацевтической промышленности [12]. В офтальмологической практике лиссаминовый зеленый применяется для прокрашивания эпителия роговицы в виде отдельно упакованных стерильных сухих полосок Lissamine Green.
Важной диагностической особенностью лиссаминового зеленого является то, что он окрашивает главным образом клетки с поврежденной мембраной и/или безжизненные клетки, как бенгальский розовый, заполняя их ядра. Другой особенностью окрашивания лиссаминовым зеленым является то, что его можно применять для диагностики эпителия при наличие покраснения глаза. Окрашивание лиссаминовым зеленым видно с большим контрастом на красном фоне, в то время как розовато-красный оттенок бенгальского розового или желтоватый оттенок флюоресцеина могут быть неразличимы на фоне красного глаза [10,12].
Лиссаминовый зеленый является единственным из перечисленных в данной статье красителей, не окрашивающим здоровые эпителиальные клетки. Результаты исследования окрашивания лиссаминовым зеленым эпителиальных клеток роговицы кролика в эксперименте и человека in vitro показали, что он не окрашивает здоровые, размножающиеся, растущие клетки и оказывает минимальное влияние на их жизнеспособность клеток [9].
Лиссаминовый зеленый не имеет канцерогенных или токсичных свойств [3,6,11]. При применении лиссаминового зеленого отсутствует жжение и другие неприятные ощущения [2]. Безопасность и удобство применения лиссаминового зеленого делают его красителем первого выбора.
Диагностическую эффективность лиссаминового зеленого в своих исследованиях подтвердил профессор M.S.Norn. Сравнивая на пациентах три вышеперечисленных красителя при различной патологии переднего отрезка глаза, он пришел к выводу, что лиссаминовый зеленый позволяет более четко дифференцировать поврежденные участки эпителия от здоровых тканей глаза [12]. Исследования Khurana А. и соавт. показали, что лиссаминовый зеленый и бенгальский розовый имеют сходную способность к быстрому реагированию при возникновении признаков сухости глаза. В исследовании, проведенного на 100 пациентах с синдромом сухого глаза, бенгальский розовый показал достоверную диагностическую эффективность в 89% случаев, а лиссаминовый зеленый в 87%. Оба красителя не вызывали окрашивания в контрольной группе [8].
Таким образом, лиссаминовый зеленый является наиболее информативным диагностическим красителем. Он позволяет более четко дифференцировать поврежденные и здоровые эпителиальные клетки, что очень важно у пользователей контактных линз. Контактная линза оказывает на эпителий роговицы и конъюнктивы не только механическое воздействие, но и способствует развитию явлений гипоксии, гиперкапнии и нарушению осмолярных эффектов [14]. Поэтому своевременная диагностика незначительных нарушений эпителия позволит предотвратить развитие более серьёзных и тяжелых осложнений.
Литература:
1. Axenfeld Theodor. Lehrbuch der Augenheilkunde. 1909, p. 32-38
2. Бржевский В.В., Сомов Е.Е. Роговично-конъюнктивальный ксероз (диагностика, клиника, лечение), 2003.
3. Clode SA: Teratogenicity and empryotoxicity study of Green S in rats. Food Chem Toxicol 1987, V.25, p.995-997.
4. Киваев А.А., Шапиро Е.И. Контактная коррекция зрения. Москва, 2000., С.104-106
5. Feenstra RPG, Tseng SCG. Comparison of fluorescein and Rose Bengal staining. Ophthalmology, 1992, V.99, N 4, p.605-617.
6. Feenstra RPG, Tseng SCG. What is actually stained by rose bengal. Acta Ophthalmologica, 1992, V.110, N 7, p.984-93.
7. Khan-Lim D, Berry M. Still confused about Rose Bengal? Current Eye Research, 2004, V.29, N4-5, p.31-317.
8. Khurana AK, Chaudhary R, Ahluwalia BK, Gupta S. Tear film profile in dry eye. Acta Ophthalmol (Copenh), 1991, N691, p.79-86.
9. Kim J. The use of vital dyes in corneal disease. Current Opinion in Ophthalmology, 2000, N 11, p.241-247.
10. Kim J, Foulks GN. Evaluation of the effect of lissamine green and rose Bengal on human corneal epithelial cells. Cornea, 1999, V.18, N 3, p.328-332.
11. Moorhouse SR, Creasy DM, Gaunt IF. Three generation toxicity study of rats ingesting Green S in the diet. Food Chem Toxicol 1987, N 25, p. 985-993.
12. Norn MS. Lissamine Green: vital staining of cornea and conjunctiva. ACTA Ophthalmologica, 1973, N 51, p. 483-491.
13. Sjogren H. Zur kenntnis der keratoconjunctivitis sicca. Acta Ophthalmol Suppl 1933, N2.
14. Tseng SCG. The ocular surface and contact lens wear. Refractive Eyecare for Ophthalmologists, 2002, N 6, p.16-19
© «ИнтелМед»
Источник
